由表 １ 可知， 硫酸粘杆菌素在纯水中最容易溶出， 随着甲醇浓度的增大， 硫酸粘杆菌素的溶出受到明显抑制。但是纯水中杂质溶出比较多， 当使用 １０ ％的甲醇溶液作为提取液时可以显著抑制杂质的溶出， 并且与纯水回收率相差很小， 因此选取 １０ ％甲醇作为提取液较好。
２．１．２ 超声作用时间对回收率的影响。在固定以１０ ％甲醇为提取液， 料液比为 １∶ ３０ 的条件下， 进行不同的超声作用时间， 其对硫酸粘杆菌素回收率的结果见表 ２。

    由表 ２ 可知， 随着超声作用时间的增加， 回收率逐渐增大， 但当作用时间达到 ２０ ｍｉｎ 后， 回收率几乎不变， 此时如果继续增加作用时间， 反而会增加杂质的溶出， 因此超声作用时间以 ２０ ｍｉｎ 为宜。
２．１．３ 料液比对回收率的影响。在固定以 １０ ％甲醇为提取液， 超声作用时间为 ２０ ｍｉｎ 的条件下，使用不同的液料比进行提取， 其对硫酸粘杆菌素回收率的结果见表 ３。

   由表 ３ 可知， 随着提取液用量的增大， 硫酸粘杆菌素回收率也不断增大， 当液料比达到 ３０∶１以后， 提取率用量的增加对回收率提高影响非常小，而且提取液回收时能耗也会增大， 因此液料比选取 ３０∶１较好。  
２．２ 提取液的富集 采用旋转蒸发仪 ８５ ℃将提取液蒸干。选取了去离子水、乙腈、流动相 ３ 种溶液各 ５ ｍＬ 溶解鸡心瓶内的残渣， 测得回收率分别是 ９４．４ ％、     ５９．１ ％、７３．８ ％。用乙腈与流动相溶解残渣时， 溶解不完全， 收率低； 用去离子水溶解残渣时， 鸡心瓶内残渣溶解充分， 回收率高。将溶液过 ０．４５ μｍ 有机微孔滤膜过滤， 即可用 ＨＰＬＣ测定。
２．３ 色谱条件的测定 将乙晴与不同 ｐＨ 值下硼砂缓冲液组成不同比例流动相， 不同流速下， 在Ｚｏｒｂａｘ Ｅｘｔｅｎｄ－ Ｃ１８ 色谱柱上， 以同一饲料样品每次进样 ２０ μＬ， 以硫酸粘杆菌素与杂质的分离效果、保留时间及其他参数为指标， 进行选择， 结果见表 ４。
   结果表明， 流动相为乙腈－ ｐＨ ６．０ 硼砂缓冲液（Ｖ乙晴∶Ｖ硼砂 ＝７５∶２５ ）， 流速为 ０．７ ｍＬ／ｍｉｎ， 检测波长 ２１５ ｎｍ， 硫酸粘杆菌素 Ｂ 的保留时间为 １３．３ｍｉｎ， 硫酸粘杆菌素 Ａ 的保留时间为 １７．５ ｍｉｎ， 所得色谱峰峰形较好， 并且实现了硫酸粘杆菌素与杂质的良好分离， 见图 １。

２．４ 线性范围、精密度和准确度 在该实验条件下， 硫酸多粘菌素 Ｅ 标准溶液的浓度在 ０．５ ～４００μｇ／ｍＬ 范围内与峰面积呈线性相关。线性回归方程为： Ｙ＝４６９８．２６３Ｘ（ｒ＝０．９９６７）。以 ３０．００ μｇ／ｍＬ 硫酸多粘菌素 Ｅ 标准溶液连续进样 １０ 次， 峰面积
响应值的变异系数为 ０．３ ％。
   以猪的配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料为基础， 每个样品选 ６ 个水平， 每个水平做 ５ 次重复以检测该方法的准确度和精密度， 结果见表５。从整体来看， 准确度和精密度均较好， 变异系数均小于 ５ ％。
２．５ 干扰实验 分别向色谱进样中添加饲料中常见成分组蛋白、纤维素酶、维生素 Ｃ、甘氨酸、谷氨酸的甲醇溶液， 结果表明， 在该色谱条件下上述成分均不干扰硫酸粘杆菌素的测定。