陈伟东,邓宗亮 (新北江制药股份有限公司,广东清远511515)
硫酸粘菌素(ColistinSulfate)是一种多粘菌素,对革兰氏阴性菌有很强的抗菌作用,几乎对所有革兰氏阴性菌有效,对绿脓杆菌有显著作用;用作饲料添加剂可刺激幼畜生长,提高饲料效率,防止大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌等革兰氏阴性菌引起的肠道疾病。根据欧洲药典4.6版,在含量测定色谱图中,以杂质占总积分面积的百分比作为限量检查数据,按归一化法,任一单一杂质不能大于4%。从发酵工艺及含量分析图谱中得出,最大杂质为菌种分解物。最大杂质峰难分离,积分计算误差大,如图1中Front峰。本文采用高效液相色谱法,分离最大杂质。
1 实验部分
1.1 仪器、试剂及药品
高效液相色谱仪(Waters600-717-2487系统);乙腈(墨克);硫酸粘菌素(广东新北江制药股份有限公司)
1.2 实验方法
1.2.1 色谱条件 色谱柱:DevelosilODS-UG-3(150mm×4.6mm);检测波长:215nm;流速:1.0ml/min;流动相:0.01mol/L硫酸盐缓冲液-乙腈(90∶10)。
1.2.2 测定方法 取硫酸粘菌素粉末25mg,精密称定,置50ml容量瓶中,加40ml水溶解,用乙腈稀释至刻度,摇匀作为样品溶液,同时制备3份,各取10μl按欧洲药典方法和本文方法进样分析,记录色谱图。色谱图图下。
在欧洲药典方法含量色谱图中,Front部分各杂质峰不能完全分离,Front部分前后基线存在漂移,基线不在同一水平线上,积分基线可以为水平基线(图3)和切线基线(图4)。经本文分析方法分离如图4,Front部分杂质峰能完全分离成UKN1、UKN2、Ez2、Mn4个杂质峰,相邻杂质峰之间的分离度分别为1.57、2.36、1.82,说明各杂质峰完全分离,其积分稳定,峰面积基本反映杂质的含量。图5的Ez2及Mn峰系统适应性数据如下表。
按色谱图3、4、5对所有色谱图积分,得出最大杂质峰的峰面积,结果如表2。
2 讨论从表中数据可看出,欧洲药典含量测定方法使用切线基线积分的最大杂质峰面积与杂质峰完全分离时的最大杂质峰面积相当,切线基线积分能较真实反映最大杂质峰Mn的含量,因此在硫酸粘菌素杂质积分计算时,使用切线基线积分,计算最大杂质含量。
参考文献:
[1]欧洲药典(4.6版)[S].3979-3980.
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