RT-PCR一步法试剂盒（混合酶法）

规 格： 50人份/Kit
储存条件： —20℃
有 效 期： 2年

产 品 简 介
RT-PCR是将反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片断。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。
一步法即反转录和PCR扩增在同一管内完成，cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖，有助于减少污染。而且由于得到的所有cDNA样品都用来扩增，所以灵敏度更高，最低可以达到0.01pg总RNA。一步法RT-PCR一般使用基因特性性引物起始cDNA合成。
本试剂盒采用的酶混合物含Mu-MLV、Taq DNA聚合酶及核糖核酸酶抑制剂，可有效防止RNA的降解。通过试剂优化，在有非特异RNA的存在下，反转录酶的活性不受抑制。采用一步法对总RNA进行高灵敏度及特异性的反转录及PCR扩增。最大的扩增片段可达2kb.

产 品 组 成
100ul RT-PCR酶混合物
150ul 10×反应缓冲液（无Mg2+）
200ul MgSO4（25mM）
120ul dNTPs(A、G、C、T) 2.5mM
1支 液体石蜡

操 作 过 程
操作之前，您需要准备好以下成分：
RNA模板
上游引物
下游引物
无菌双蒸水

加样之前，需将各组分稍微混匀及离心。
每管加入：
RT-PCR酶混合物 2.0ul
10×buffer(无Mg2+) 3.0ul
MgSO4（25mM） xul
dNTP（2.5mM） 1.2ul
上游引物 xul
下游引物 xul
RNA模板 xul
无菌双蒸水 至30ul

铺上液体石蜡 30ul
稍微混匀离心后，37℃反转录30-60分钟，得到的cDNA即可进行PCR扩增。

注 意 事 项
1. 建议使用试剂盒提供的Buffer.
2. 镁离子浓度对反应结果影响很大。可从1mM到3mM，间隔0.5mM进行一系列反应，确定对于每个模板和引物的最佳镁离子浓度。建议Mg2+使用终浓度为1.5mM。注意：对实时定量PCR，使用3mM到5mM的镁离子浓度。
3. 设计引物时，避免在引物3＇端含有互补序列。避免可以形成内部发卡结构的序列。另外，设计时应考虑设计Tm值相近的引物。
4. 使用适量模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱。
5. 使用热盖式PCR仪，可以不加液体石蜡。
价格：1000元/50人份/KIT
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